Comment calculer la concentration d'anticorps

Une des méthodes les plus courantes de calculer une concentration en protéines dans un environnement de laboratoire est d'utiliser un dosage de Bradford . Le réactif de Bradford est un réactif colorimétrique qui change de couleur en fonction de la concentration en protéines . En combinant une courbe standard connu avec le réactif de Bradford , vous pouvez créer une mesure contre laquelle vous pouvez calculer la concentration de toute protéine , y compris antibodies.Things Vous aurez besoin
anticorps purifié dans un tampon connu
tampon correspondant à la suspension de l'anticorps
lyophilisée de sérum albumine bovine (BSA )
tubes Microcentrifge
Laboratoire stylo
Vortex
échelle de laboratoire
papier
1 ml pipette
Bradford réactif
lecteur de plaque colorimétrique de plaque multi- puits
Microsoft Excel de la livre Lab
Pen
Voir Plus Instructions
Créer un standard

1

mesurer 200 mg de BSA sur le papier de pesée à l'aide d'une échelle de laboratoire . Enfermer dans un tube à centrifuger . Ajouter 2 ml de tampon dans le tube à centrifuger contenant 200 mg de BSA . Marquez ce tube "1"
2

Tube Vortex 1 jusqu'à ce que la BSA est complètement dissous .
3

Supprimer 500 ul de la BSA dans le tampon et le transfert à un deuxième tube. Marquez ce tube "2" Ajouter 500 ul de tampon plaine de Tube 2
4

Supprimer 200 ul de BSA dans le tampon de tube 1 et le transférer dans un nouveau tube . Marquez ce tube "3" Ajouter 800 ul de tampon plaine de Tube 3
5

Supprimer 100 ul de BSA dans le tampon de tube 1 et le transférer dans un nouveau tube . Marquez ce tube "4" Ajouter 900 ul de tampon plaine de Tube 4
6

Supprimer 10 ul de BSA dans le tampon de tube 1 et le transférer dans un nouveau tube . Marquez ce tube "5" Ajouter 990 ul de tampon plaine de Tube 5. Tubes de 1 à 5 comprennent une série standardisé et calibré . Le premier tube a une concentration connue de 100 mg /ml; la seconde , à 50 mg /ml; la troisième , 20 mg /ml , le quatrième , 10 mg /ml; et la cinquième , à 1 mg /ml . Chaque tube contient environ 1 ml de solution .
Créer Anticorps dilutions
7

Ajouter 5 0ul d'anticorps purifié à 95 0ul de tampon . Marquez ce tube " A. "
8

Ajouter 10 ul d'anticorps purifié à 990 ul de tampon . Marquez ce tube " B. "
9

Ajouter 2 ul d'anticorps purifié à 998 ul de tampon . Nommez ce " C "
tube Chargez la plaque
10

Placer 0,5 ml de tampon plaine dans les premiers puits dans deux colonnes de la plaque multi-puits .
Photos 11

Placer 0,5 ml du contenu du tube 1 dans le second puits des deux premières colonnes de la plaque multi-puits . Continuer sur la série graduée jusqu'à ce que les deux premières colonnes contiennent 0,5 ml d'une solution étalon de BSA de chacun des tubes 1-5 , y compris les puits de tampon plaine .
12

Ajouter 0,5 ml de réactif de Bradford à chaque bien . Agiter la plaque pour mélanger le réactif avec les solutions protéiques , en faisant attention de ne pas renverser le contenu de l'un des puits . Attendez 5 minutes .
13

Lire la plaque selon le protocole spécifique à votre lecteur de plaques à une longueur d'onde de 595 nm .
Calculer Anticorps Concentration

14

copier les valeurs lues à partir du lecteur de plaque dans Microsoft Excel .
15

Créer un graphique à partir des deux colonnes de valeurs représentant la norme BSA aide de l'Assistant graphique dans Microsoft Excel .

16

Tracer les points mesurés à partir des dilutions d'anticorps dans le graphique Excel . Lire la concentration correspondant de la protéine selon la valeur de l'axe des y pour le point sur ​​le graphique Excel de dilution d'anticorps .
17

Selon que vous utilisez les valeurs obtenues à partir Tube A, B ou C , multiplier la valeur soit 20 , 40 ou 500 , respectivement . La valeur résultante est la concentration de votre anticorps purifié .