GSH Essai Protocoles

glutathion ou GSH est une protéine présente dans les plantes et les animaux . Il travaille pour aider réactions enzymatiques dans la détoxication des contaminants de l'environnement . De plus , il facilite le transport d'acides aminés dans les cellules et permet de maintenir les réactions de réduction protéines sulfhydryle . Protocoles GSH dosage utilisent des tampons de GSH , normes, substrat , des enzymes et des réactifs . En suivant le procédé spécifique est pertinent pour l'issue de l'essai. Méthode enzymatique recyclage

La méthode de recyclage enzymatique , GSH , utilise la glutathion réductase à quantifier GSH . Ce protocole est spécifiquement pour le plasma , échantillons de tissus ou de cellules en culture . Ajouter le réactif DTNB (acide 5 -5'- dithio-bis -2- nitrobenzoïque ) en GSH . Le groupe sulfhydryle en GSH réagit avec le réactif et produit un acide jaune appelé 5-thio -2- nitrobenzoïque (TNB ) . Ajouter glutathion réductase au mélange acide et GSH à recycler GSH et produire plus d'acide . Dans cette procédure, le taux de production d'acide est proportionnelle à la réaction de recyclage de GSH; par conséquent, mesurer l'absorbance de l'acide TNB aide d'un spectrophotomètre . L'absorbance fournit une estimation de la quantité réelle de GSH dans l'échantillon .
Foie cellulaire glutathion Essai

Ce protocole analyse la quantité de GSH dans l'hépatocarcinome humain ( cancer du foie cellules ) . Pour mener à bien cette procédure , utilisez la méthode colorimétrique pour la détermination GSH de réduire et d'oxyder GSH . Réduire GSH en utilisant du 5 -5'- dithiobis (acide 2-nitrobenzoïque ou DTNB ) pour former le produit coloré

Photos, l'acide 2- nitro-5- thiobenzoïque et le glutathion oxydé (GSSG ) . Utilisation de la glutathion réductase pour réduire GSSG pour former à nouveau le GSH . Afin de mesurer la quantité de GSH dans les cellules du foie , lisez l'échantillon à 415 absorbance cinétique sur un lecteur de microplaques .

Apoptose des cellules

Dans ce protocole , GSH est utilisée pour détecter l'apoptose cellulaire ( mort ) à travers la mesure de la diminution de la réduction de GSH . Une diminution de la concentration de GSH cellulaire est un indicateur de la mort cellulaire. Colorer les cellules échantillons avec vert Thiolite non fluorescent . Le vert s'accumule dans le cytosol Thiolite ( plasmique de la cellule ) et les mitochondries ( centrale ) de la cellule . Utilisez un cytomètre de flux à 490/520 nanomètres de visualiser la quantité de GSH dans les cellules .
La concentration totale de GSH en espèces animales et végétales échantillons

Mesurer la concentration de GSH totale sous la forme à la fois réduit et oxydé dans différents échantillons d' animaux et de plantes . Ajouter le réactif thiol général , 5 -5'- dithiobis [ acide 2-nitrobenzoïque ] . Le réactif thiol réagit avec GSH pour former 412 nm chromophore , l'acide 5 - thionitrobenzoïque ( TNB ) et GS -TNB . Ajouter glutathion réductase et phosphate adénine Beta -nicotinamide (NADPH ) pour réduire GS -TNB . Le glutathion publiera également une seconde molécule TMB et recycler le GSH . En outre, toute GSH oxydé ( GSSG ) présent dans le mélange de la réaction fromed disulfure est également réduit en GSH . Utilisez un lecteur de microplaques à 405 nanomètres de lire le niveau d'absorption et d'indiquer la concentration totale de GSH .