Activité basale du promoteur SP6

expériences in vitro sont celles réalisées en dehors d'un organisme vivant dans un tube à essai ou un environnement similaire . Les scientifiques peuvent faire des copies d'ARN ou des transcriptions d'un gène in vitro par un processus appelé transcription in vitro . L'enzyme qui permet la transcription d'ARN en fonction du gène est appelé une ARN polymérase . Une telle molécule est la polymérase SP6. Il nécessite un fragment d'ADN appelé le promoteur SP6 afin de fonctionner correctement. Promoteurs

Un promoteur est la région de l'ADN lié par une ARN polymérase d'initier la transcription . La polymerase de SP6 nécessite qu'une séquence très spécifique soit présent dans le promoteur afin de lier , de sorte lorsque le polymerase de SP6 est utilisée pour la transcription in vitro , le gène doit contenir le promoteur SP6 pour la transcription de se produire. La polymerase de SP6 est d'un type de virus appelé un bactériophage; entreprises de biotechnologie produisent ce polymérase en infectant les bactéries de salmonelles présentant un phage et l'isolement de la polymérase suite .
Expression

d'expression ou de l'activité basale se réfère au niveau d'expression en l'absence de d'autres molécules qui feront augmenter ou diminuer le niveau de transcription . Des activateurs ou des répresseurs , par exemple, sont des protéines qui peuvent se lier au promoteur ou à d'autres régions de régulation de gènes et, soit d'aider à un recrutement de l'ARN polymerase ou l'empêcher de se lier . Inducteurs sont des molécules qui stimulent la production du produit du gène en élevant les niveaux d'expression .

SP6

L'activité basale du promoteur SP6 variera en fonction des conditions de votre expérience . Le plus important , bien sûr , est de savoir comment vos conditions expérimentales peuvent affecter l'activité et comment SP6 compare à d'autres systèmes . En général , polymérase SP6 et promoteurs offrent une efficacité inférieure à celle des systèmes de transcription in vitro T7 ou T3 dans , bien que dans des conditions idéales SP6 est à peu près comparable à ces deux autres . Comme SP6 , tant T7 et T3 utilisent une ARN polymérase de bactériophage .
Conditions

concentration de sel et de température sont deux facteurs importants pour déterminer l'activité de base . SP6 est très sensible à la concentration en sel , de sorte que des concentrations en sel plus élevées peut diminuer fortement son activité . Toutes choses égales par ailleurs , l'expression est significativement supérieure à 104 degrés Fahrenheit de à 99 degrés Fahrenheit . Concentration des nucléotides est un autre facteur important. De faibles concentrations peuvent causer la transcription de mettre fin prématurément et réduire ainsi votre efficacité . L'augmentation de la concentration de nucléotides permet d'éviter ce problème . Si vous êtes la synthèse de sondes d'ARN , cependant, ajouter trop de nucléotide non marqué va diminuer la quantité de nucléotide marqué dans le produit final .