Comment faire pour dépanner un dimère Primaire

La réaction en chaîne par polymérase , ou PCR , est une technique de biologie moléculaire utilisées pour amplifier des régions spécifiques de l'ADN . La PCR est dépendante des amorces , qui sont des brins courts d'ADN qui sont complémentaires et spécifique à l'ADN d'intérêt . Alors que les amorces seront généralement lier à l'ADN correspondant à leur ordre , ils vont parfois se lier et amplifier l'autre , ce qui provoque le phénomène connu sous le nom d'un dimer.Things amorces dont vous aurez besoin
séquences des amorces
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Photos 1

Examiner la teneur en GC ( nombre de G et C de son ) dans la séquence d'amorçage . GC liaison est plus forte que la liaison A en raison de la liaison hydrogène supplémentaire entre la cytosine et la guanine . Une adhérence optimale est d'au moins 50 pour cent la teneur en GC .
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Examiner la température de recuit de votre réaction. Les basses températures de recuit, généralement définis comme 55 ° C ou au-dessous , peuvent provoquer la liaison non spécifique de l'amorce , ce qui peut provoquer des dimères d'amorces , en plus de l'amplification des sections génomiques incorrectes .
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Double -vérifiez la quantité et la concentration d'amorces que vous avez ajouté à la PCR . Un excès d'amorces , en général plus de 75 pmol , peut causer des dimères d'amorces , aussi bien.