Comment faire pour réduire la liaison non spécifique à conteneurs

Dans un dosage immunologique de la capacité de liaison dans un conteneur ou dans des puits de microplaques est supérieure à la quantité de protéine placée dans le conteneur ou puits . Pour réduire ou éviter des anticorps ou d'autres types de protéines et molécules d'absorber le conteneur ou le puits , le dosage doit être lavée avec le tampon approprié et un réactif de blocage spécifique doit être ajouté . Le type de tampon et le réactif de blocage choisi dépend du type de assay.Things expérimentales dont vous aurez besoin
Plate puits
solution tampon
Blocage réactif
Antigène Anticorps Photos de pipette

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Manteau Afficher MoreInstructions les puits de la plaque avec l'antigène . Utilisez une dilution de l'antigène . Solutions pures de l'antigène ne sont pas nécessaires étant donné que seulement environ 3 pour cent de la protéine dans l'échantillon est la protéine cible . Lors de la dilution , en sorte que les échantillons contiennent l'antigène à une concentration qui se situe dans la plage de détection de l'anticorps. Pipeter la solution de dilution d'antigène en bas des puits de la plaque . Certaines plaques peuvent être pré- revêtues d' antigène . Lisez les instructions fournies avec les puits de la plaque .
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Couvrir les plaques avec un plastique adhésif et incuber pendant la nuit . Laver les plaques avec des solutions tampons , tels que du tampon Tris salin ou du sérum physiologique tamponné avec un phosphate . Pour laver , rincer les plaques à l'aide d'une pissette remplie avec la solution de tampon sur un évier de laboratoire . Caresser les plaques avec une serviette en papier pour enlever les gouttes restantes de solution tampon .
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Réduire la liaison non - spécifique de protéines et de molécules en utilisant un tampon de blocage ou réactif , tel qu'un détergent bloqueur , lait en poudre ou de sérum bovin . Le type de réactif de blocage utilisée dépendra du dosage. Ajouter le réactif de blocage dans les puits en utilisant une pipette . Couvrir la plaque avec de la colle à nouveau plastique et incuber pendant la nuit.
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Re - laver les puits d'une plaque à nouveau en utilisant une solution tampon . Ces étapes vont diminuer la quantité de liaison non spécifique qui peut se produire dans les puits de la plaque avant d'ajouter la solution d'anticorps nécessaires à la procédure . En outre, les réactifs de blocage peuvent aider à réduire les couleurs de fond dans les résultats des tests .