Toutes les techniques de transfert commencent par électrophorèse sur gel. Le gel est plus ou moins comme un mince rectangle de gélatine . Une petite quantité de molécules biologiques a spécialement préparés est mis sur le gel , à une extrémité , puis un champ électrique est appliqué à partir d' une extrémité à l'autre . Les molécules sont préparés électriquement chargées, de sorte que le champ électrique entre eux tire à travers le gel . Ils se déplacent lentement à travers le gel d'épaisseur jusqu'à ce que le champ est éteint. Les molécules les plus légères se tiré plus vite et se déplacent plus , les molécules les plus lourdes prennent plus de temps à se déplacer de sorte qu'ils ne font pas aussi loin .
En utilisant des gels
Dans la pratique , plusieurs échantillons différents sont déposés répartis le long d'un bord du gel . Après que le champ électrique est appliqué , les différents échantillons répartis en direction de la bordure opposée du gel . La diffusion de chaque échantillon est appelé une «voie ». La voie sera généralement avoir quelques bandes différentes correspondant à des molécules de différents poids dans chaque échantillon . Il ya plusieurs façons différentes de faire les bandes visible . Analyser le gel donne biologistes une idée de la taille des molécules différentes , mais pour obtenir de plus amples informations , une méthode différente est nécessaire . C'est là blot arrive.
Blot
Blot est une façon de prendre les molécules qui ont été écartées dans le gel et les rendre disponibles pour plus d' analyse . De la même façon papier buvard absorbe l'encre en vrac --- ou fait dans les jours quand les gens utilisés stylos --- blot biologique " absorbe " les molécules de gel dans un matériau différent . Les molécules se retrouvent dans le même schéma , mais maintenant dans un papier spécial ou une feuille de plastique . Les molécules se liés à la feuille de sorte qu'ils ne bouge plus , et alors ils peuvent être trempées dans une solution d'autres molécules sondes qui fournissent plus d'informations sur les molécules . Il ya plusieurs façons de le faire ces étapes , mais le principe est le même pour tous.
Sud, du Nord et de Western Blot
biologiste Edwin Southern était la d'abord de développer une technique de blotting . Il a développé tous les détails nécessaires pour être sûr que l'électrophorèse sur gel de l'ADN pourrait être transféré et mesuré dans un matériau de séchage avec précision. Cette méthode a été nommé d'après lui : Southern Blot . D'autres scientifiques ont compris comment faire le même travail général de la technique de l'ARN , et --- dans le style typique de fun-loving scientifique --- appelé leur méthode détaillée Nord Blot . Plus tard, la procédure a été modifiée pour la mesure de protéines , et a été appelé Western Blot . Les trois techniques utilisent les mêmes principes : . Mesures du Sud ADN , mesures d' ARN du Nord , les mesures protéines occidentaux