Comment faire pour extraire l'ADN à partir de feuilles de plantes

Usine matière organique est composée de nombreuses cellules , dont chacune contiennent l'ADN qui contient les instructions pour la croissance et la fonction . Les scientifiques peuvent souhaiter étudier tout ou partie du matériel génétique présent dans les cellules , et donc besoin d'extraire en toute sécurité l'ADN du matériau de structure et machinerie cellulaire qui entoure it.Things Vous aurez besoin
2 grammes de feuilles
pilon et un mortier
Six 15ml des tubes à centrifuger de Centrifugeuse de bain d'eau de la balance
étamine
un tube Eppendorf de 1,5 ml
100ml CTAB tampon d'extraction
bêta- mercaptoéthanol 2 ml
7ml 24 : 1 chloroforme : alcool isoamylique mélange
50 microlitres de RNAse A à une concentration de 10 mg /ml
Pipettes
6 ml d'isopropanol
2 ml 70 % d'éthanol
1ml d'eau déminéralisée stérile

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Le 1

Remplir le bain-marie au niveau recommandé avec de l'eau , qui varie selon les caractéristiques de chaque constructeur , et le mettre en marche . Réglez le bain-marie à 65 degrés Celsius et lui permettre de monter la température . Placez le récipient de l'isopropanol sur la glace . Réglez la centrifugeuse à 3000 tours par minute à une température de 20 degrés Celsius .
2

Poids 2 g laisse sur un équilibre et placez- les dans un mortier . Ajouter suffisamment de bêta -mercaptoéthanol par l'intermédiaire d' une pipette dans un récipient de tampon d'extraction de sorte que le produit final est constitué d'un à deux pour cent de bêta -mercaptoéthanol . Par exemple , si vous avez un volume de tampon qui mesure environ 100 ml , puis ajouter 2 ml de bêta- mercaptoéthanol dans le récipient et bien mélanger .
3

Pipette tampon d'extraction 7 ml dans le mortier . Ecrasez le mélange dans un liquide homogène avec le pilon .
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Pliez un morceau de gaze sur pour former quatre couches . Filtrer et presser le liquide à travers les couches dans un tube centrifuge de 15 ml .
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Placer le tube dans le bain-marie pendant 30à 60 min utes . Agiter le tube pour mélanger son contenu à chaque quart d'heure . Laisser refroidir le tube à température ambiante après la période de temps plein est en hausse.
6

Remplir le tube avec le chloroforme et le mélange alcool isoamylique ( il contient 24 parties de chloroforme à un isoamylalcool partiel), de sorte que le tube contient environ la moitié de l'échantillon et la moitié de la nouvelle addition de liquide . Boucher le tube et retournez-le plusieurs fois lentement pour les mélanges de fluides .
7

Mettre le tube dans la centrifugeuse et le laisser tourner pendant 10 minutes.
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Lieu 50 ml RNAse A dans un nouveau tube de la centrifugeuse. Introduire à la pipette le surnageant (la couche d'avance en tête du tube au-dessus d'une couche blanche de débris ) dans le premier tube hors tension et le déplacer vers le second tube . Boucher le tube et inverser plusieurs fois pour mélanger le contenu ensemble. Maintenir le tube à la température ambiante pendant une heure.
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Effectuer les étapes 6 et 7 encore deux fois de sorte que vous avez un tube de prélèvement clair. Puis ajouter jusqu'à 9 ml de liquide clair du tube final dans un nouveau tube . Ajouter 6 ml d'isopropanol et inverser les tubes 10 fois d'une manière douce si l'ADN tombe hors de la solution et en une forme solide . Puis centrifuger le tube pendant 10 minutes , ce qui devrait créer une pastille d'ADN dans le fond du tube .
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Décanter le liquide dans le tube de sorte que la pastille reste . Pipette 2 ml 70 % d'éthanol et le lieu de retour dans la centrifugeuse pendant cinq minutes . Verser la partie liquide de nouveau . Utiliser un embout de pipette stérile pour ramasser le culot et le déplacer vers un 1,5 ml tube stérile Eppendorf . Pipette dans 200 microlitres d'eau déminéralisée stérile et laissez l'ADN dissoudre entièrement dans le liquide , ce qui peut prendre du jour au lendemain . L'échantillon est alors prêt pour l'analyse .