Allumez le spectromètre et zéro en mettant de l'eau distillée dans une cuvette et courir comme un échantillon . Différents spectromètres auront logiciels ou des moyens de fonctionnement légèrement différent, mais chaque devraient venir avec des instructions claires sur la façon de calibrer avec un échantillon à blanc d'eau distillée .
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Remplir une cuvette avec le premier échantillon de connue concentration . Exécutez l'échantillon pour déterminer la valeur d'absorbance . Notez le numéro de l'échantillon , la concentration déjà connue et la lecture de l'absorbance . Par exemple , l'échantillon 1 peut avoir une concentration de 0,05 mole par litre et une absorbance de 400
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Remplir une nouvelle cuvette avec l'échantillon suivant et le lancer à travers le spectromètre . Notez le numéro de l'échantillon , la concentration et absorbance . Par exemple, l'échantillon 2 peut avoir une concentration de 0,5 mole par litre et une absorbance de 4,000 . Faites de même pour le troisième échantillon . Pour cet exemple , supposons que l'échantillon 3 a une concentration de 5 moles par litre et une absorbance de 40.000 .
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Utilisez la - Lambert Beer loi pour calculer le coefficient d'absorptivité molaire pour chaque échantillon . Cette équation indique que l'absorbance est égale à la concentration de la solution , multiplié par la longueur du trajet ( la largeur de la cuvette ), multipliée par le coefficient d' absorption molaire : A = EBC , où e est le coefficient d' absorption molaire , b est la longueur du chemin , c est la concentration et A est l'absorbance . Multiplier la longueur de trajet en cm par la concentration , puis diviser la densité optique par ce nombre. Pour cet exemple, supposons que la cuvette est de 1 cm de large . Pour l'échantillon 1 , multiplier par 1 0,05 , ce qui équivaut à 0,05 . Divisez 400 par 0,05 pour un coefficient d'absorptivité molaire de 8000 .
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Effectuer le même calcul pour les autres échantillons . Pour l'échantillon 2 , on multiplie par 0,5 pour une raison de 0,5 . Diviser 4000 par 0,5 pour obtenir une constante de capacité d'absorption molaire de 8000 . Le même calcul pour l'échantillon 3 donne également un résultat de 8000 . Dans des conditions de laboratoire réels , chaque échantillon produira une constante légèrement différente . Enregistrer chacun un .
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toutes les constantes de absorptivité moyenne calculée molaires en les additionnant et en divisant le total par le nombre d'échantillons connus que vous avez rencontrés . Vous pouvez maintenant utiliser le coefficient d'absorptivité molaire résultant d'estimer la concentration d'échantillons inconnus .