Prendre quatre tubes propres et mesurer 100 microlitres d'acétate d'éthyle dans le premier avec votre pipette . Ajouter 50 microlitres de la deuxième , 25 au troisième et 5 à la quatrième .
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Changer embouts de pipette et ajouter de l'eau déminéralisée à chaque tube . Pour le premier tube ajouter 1,8 mL , puis 1,9 mL au deuxième tube , 1,95 mL à la troisième tube et 1,6 mL à la quatrième . Agiter avec la pointe de la pipette pour mélanger , en étant sûr de changer les embouts de pipette entre les tubes .
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Transférer 1 ml du mélange dans chaque tube à quatre cuves propres . Encore une fois , n'oubliez pas de changer les embouts de pipette entre les tubes .
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Insérez le premier des quatre cuvettes dans un spectrophotomètre calibré masqué et mesure d'absorption à 215 nm . Si vous n'êtes pas sûr de savoir comment changer la longueur d'onde et /ou blanc du spectrophotomètre , consulter les instructions du fabricant; la procédure peut varier quelque peu en fonction de l'appareil. Notez la valeur à mesurer et prendre des mesures pour le contenu des trois autres cuvettes .
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Prendre une ampoule à décanter propre et assurez-vous que le robinet de vidange ou à la fin est fermé . Retirez le bouchon au sommet.
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Ajouter 2 ml d'acétate d'éthyle, suivie par 15 mL d'eau et 15 ml d' octanol . Si nécessaire, vous pouvez soutenir votre ampoule à décanter avec un anneau sur un support annulaire pendant que vous le faites .
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Retirez l'entonnoir de verre et remettre le bouchon . Tenir l'ampoule à décanter dans les deux mains avec une main placée sur le bouchon pour vous assurer qu'il ne sort pas . Agiter l'ampoule avant et en arrière à quelques reprises . Puis inclinez-le vers l'arrière et ouvrir le robinet pour réduire la pression . Répétez cette procédure jusqu'à ce que vous avez secoué le contenu pour un total de 30 secondes. Assurez-vous que vous secouez toujours une ou deux fois , puis relâcher la pression. Si vous autorisez pression s'accumule à l'intérieur , il pourrait causer le bouchon de sortir et la libération de tous les contenus sur votre paillasse .
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Placez l'ampoule à décanter sur un anneau fixé à un support de bague . Laisser le contenu de se séparer en deux couches. La couche supérieure est octanol; la couche inférieure est de l'eau . Recueillir la phase de l'eau et de mesurer son absorption dans la région UV du spectre .
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Placer une petite (~ 25 ml) flacon sous l'ampoule à décanter et vider quelques mL de la couche d'eau dans le flacon . Retirer 1 ml du contenu de la fiole avec votre micropipette et le transférer dans une cuvette propre.
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Insérez la cuve dans le spectrophotomètre et mesurer l'absorbance à 215 nm .
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Prenez vos données d'absorbance et entrez dans un tableur comme Open Office ou Excel . Pour les quatre échantillons d'acétate d'éthyle -vous préparé au début , entrez la molarité dans une colonne et la capacité d'absorption dans une colonne voisine . La molarité pour les quatre échantillons est la suivante: 100 microlitres échantillon: 0,5091 molaire; 50 microlitres échantillon: 0,2545 molaire; 25 microlitres échantillon: 0,1273 molaire; et 5 microlitres échantillon: . 0,02545 molaire
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Utilisez votre tableur pour préparer un graphique nuage de points de ces quatre points de données avec molarités ou des concentrations sur l'axe des x et l'absorption de l' y . Si vous n'êtes pas sûr de savoir comment faire cela , reportez-vous au guide de l'utilisateur ou le menu d'aide pour votre tableur . Utilisation du tableur , s'adapter à une équation linéaire ou ligne de meilleur ajustement de la forme y = mx + b à ces données . La variable x dans cette équation est la concentration , tandis que la variable y est la capacité d'absorption .
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Prenez la capacité d'absorption de votre mL éthyle échantillon de 2 acétate de l'ampoule à décanter et le diviser par le m valeur de l'équation votre tableur calculé et soustrait la valeur b . Si la valeur m est de 1,2 , par exemple , et la valeur b est de 0,2 tandis que la capacité d'absorption est de 0,42 , il faut soustraire 0,2 de 0,42 et diviser le résultat par 0,5 pour obtenir une concentration de 0,183 mole par litre .
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Multipliez votre valeur de concentration par 0.015 litres puisque vous aviez 10 ml d'eau dans votre ampoule à décanter . Si votre concentration était de 0,183 , par exemple , vous multipliez par 0,015 pour obtenir 2,745 x 10 ^ -3 moles d' acétate d'éthyle présents .
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Soustraire le résultat de l'étape 14 de 0,02036 moles d' acétate d'éthyle , qui était le montant initialement ajouté . Si vous aviez 2,745 x 10 ^ -3 moles dans la couche d'eau , par exemple , soustraire ce nombre de 0,02036 moles d'obtenir 0,01762 moles présentes dans la couche d' octanol .
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Diviser la quantité présente dans le octanol couche par la quantité présente dans la couche d'eau , et cela donne le coefficient de partage de votre liquide . Cet exemple utilise l'acétate d'éthyle , mais vous pouvez utiliser d'autres liquides aussi longtemps que vous ajustez les valeurs de concentrations et de molarité appropriée .