Comment identifier les bacilles Gram positifs

Depuis les années 1880 , le test de coloration de Gram reste une méthode d'identification et de classification bactérienne . Microbiologistes souvent effectuer l'essai de Gram comme la première étape dans l'identification des types particuliers de bactéries en forme de bâtonnet à partir du genre Bacillus. La coloration de Gram est nommé pour son inventeur , bactériologiste danois Hans Christian Gram . La technique fonctionne en raison d'une différence dans gram positif et gram négatif bactérienne physiologie de la paroi cellulaire . Certaines tiges Gram-positifs provoquent des maladies graves telles que le charbon et tetanus.Things que vous devez Gants de
vêtements laboratoire
chaussures revêtements
autocuiseur
bactéries colonie Photos Agar
Petri plats de l' eau
inoculation boucle Photos de méthanol de lame de verre
bec Bunsen
tache violette cristal
iode tache réactif Photos de solution Fuchsin
Decolorizer de Safranin
papier absorbant
microscope
Afficher Instructions
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Sécuriser l'utilisation d'un espace de laboratoire propre, aseptique pour effectuer le test de coloration de Gram . Porter des vêtements de laboratoire propre et couvre-chaussures pour éviter la contamination . Utiliser des gants et un masque lors de la manipulation des cultures bactériennes . Isoler une colonie de bacilles pour votre test et pousser sur une gélose riche en éléments nutritifs dans des boîtes de Pétri . Stériliser les boîtes de Pétri et la gélose avec une cocotte-minute avant de l'utiliser .
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Ajouter quelques gouttes d'eau propre à la boîte de culture . Répartissez sur l'agar-agar . Faire glisser une boucle d' inoculation légèrement à travers la surface de la gélose . Transférer l'échantillon sur une lame de verre propre et de l'étaler uniformément dans la zone circulaire de la taille d' un centime. Conserver la taille de l'échantillon minimal; vous devriez être à peine capable de voir à l'œil nu .
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Appliquer 95 pour cent de méthanol sur le frottis de diapositives pendant deux minutes pour fixer les cellules et éviter des distorsions de leur morphologie . Sécher à l'air de la diapositive ou chauffer doucement sur une faible flamme du bec Bunsen . Déplacez le curseur va-et -vient à la chaleur uniformément et éviter les points chauds localisés . Appliquer la chaleur uniforme et cohérente . Évitez de prendre la lame de la flamme jusqu'à ce que vous avez terminé le chauffant .
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Verser cristal violet réactif tache sur la lame fixe . Laisser reposer pendant 30 à 60 secondes . Laver la tache avec de l'eau du robinet pendant quelques secondes . Égoutter l'excès d'eau de la diapositive . Recouvrir la lame avec le réactif iode tache pendant 30 à 60 secondes. Laver l' iode avec de l'eau du robinet . Incliner la lame et ajouter quelques gouttes de décolorant . Appliquez-le jusqu'à ce que le ruissellement est propre . Laver la lame .
5

tremper la lame avec de couleur rose safranine réactif contre-coloration pendant 30 secondes . Vous pouvez remplacer la solution de base de fuchsine pour la safranine . Lavez délicatement la lame et le tremblement de l'excès d'eau . Séchez avec du papier absorbant , puis sécher à l'air de la diapositive. Examiner la lame préparée sous un microscope équipé d' une source de lumière . Rechercher et identifier les bacilles Gram positifs de bactéries avec une coloration bleue ou violette du test de coloration de Gram .